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本制品是将PCR反应所需的Pfu酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液以及优化剂和稳定剂，预先配制成2倍浓度的混合物。2×Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化，高保真，错误率仅为1.3×10-6。使用时只需要加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便。

用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。

• 高保真：Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。
  
• 灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
  
• 快捷：PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。

组分	1mL	5mL
2×Pfu MasterMix	1mL	5×1mL
说明书	1份	1份

保存：-20℃


经检测无外源核酸酶残留，qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。


Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平末端，无3'端"A"突出，除使用BalbRec PCR一步定向克隆试剂盒（Cat.No:NR005）外，其它PCR产物的克隆方案有：

• PCR前引物进行5'端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。
  
• 将产物3'末端加A后再与T载体连接。
  
• 由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3'端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20～30mers。另外为了减少由3'→5'外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系。

• 需要溶解完全后使用，防止离子浓度不均匀。
  
• 应根据实验目的选择合适的循环数，循环数过少，会造成扩增量不足。循环数过多，扩增量增加，但突变率会增加，并造成非特异性扩增。
  
• 根据引物Tm值设置合适的退火温度，退火温度过低，会造成非特性扩增。退火温度过高，可能扩增不到目的条带。

• 常用反应体系（50μL）：
  

  成分	用量
  2×Pfu Master Mix	25μL
  上游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
  下游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
  模板	1～50ng（质粒） 10ng～1μg（基因组）
  ddH2O	至50μL

  注：Mg²⁺终浓度为2mM。
  
• 常用PCR反应程序：
  
  • 当扩增片段＜3K：
    

    反应阶段	温度	时间	循环数
    预变性	94℃	90s	1
    变性	94℃	20s	30
    退火	50～60℃	20s
    延伸	72℃	1kb/60s
    终延伸	72℃	5min	1
    保温	4℃	-	1

  • 当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：
    

    反应阶段	温度	时间	循环数
    预变性	94℃	5min	1
    变性	94℃	5s	30
    退火/延伸	68℃	1kb/60s
    终延伸	72℃	5min	1
    保温	4℃	-	1

图1．50μL扩增体系中，分别以50ng～0.05ng人基因组DNA模板，对特定基因片段进行扩增。
泳道1：50ng；泳道2：5ng；
泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；
泳道M：DNA Ladder 2000。


PCR MasterMix选购指南：

编号	产品名称	特点
适用于菌落鉴定、菌液鉴定及常规PCR鉴定实验的Mix系列
JN0030	2×Taq PCR MasterMix	高性价比PCR Mix，使用简便，扩增灵敏度高
JN0034	2×Complex Taq PCR MasterMix	JN0030改进版，性能更均衡，适用面更广
JN0040	2×Fast Taq PCR MasterMix	最快速的PCR试剂，常规PCR鉴定45分钟内知道结果
JN0035	2×RoomTop Taq PCR MasterMix	可放在手边的PCR试剂，室温稳定存放60天
JN0036	2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix	室温稳定存放60天，高速PCR试剂，常规PCR鉴定45分钟内知道结果
适用于一些较难扩增的PCR条带的鉴定及短片段克隆
JN0032	2×Taq Plus PCR MasterMix	扩增效率更高及较好的保真度
JN0038	2×Hot Start Taq PCR MasterMix	采用热启动Taq，可获得很好的特异性
JN0041	2×Ultra Taq PCR MasterMix	高速扩增酶，优化配方，解决PCR扩增难题的，灵敏度高
高保真酶试剂，适用于长片段基因克隆
JN0031	2×Pfu PCR MasterMix	采用高保真酶，适用于基因克隆
JN0043	2×Fast Pfu PCR MasterMix	采用改良型高保真酶，更好的扩增效果，4倍扩增速度；扩增迅速
防止PCR产物二次污染、极高检测灵敏度的PCR试剂
JN0047	2×PCR MasterMix(防污染)	采用dUTP/UDG酶系统，从根本上杜绝PCR产物二次污染
JN0033	2×Genotyping PCR Kit（nomal）	极高检测灵敏度，可达到普通PCR试剂102至104倍扩增灵敏度

PCR MasterMix性能对比表：

名称	编号	扩增时间	扩增长度	是否有3'-A	基因组扩增
2×Taq PCR MasterMix	JN0030	1min/kb	≤8kb	√	+
2×RoomTop Taq PCR MasterMix	JN0035	1min/kb	≤8kb	√	++
2×Complex Taq PCR MasterMix	JN0034	1min/kb	≤8kb	√	+
2×Fast Taq PCR MasterMix	JN0040	15s/kb	≤8kb	√	+
2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix	JN0036	15s/kb	≤8kb	√	++
2×Ultra Taq PCR MasterMix	JN0041	15s/kb	≤8kb	√	+++
2×Taq Plus PCR MasterMix	JN0032	1min/kb	≤20kb	√	++++
2×Ultra Taq Plus PCR MasterMix	JN0042	15s/kb	≤30kb	√	++++
2×Hot Start Taq PCR MasterMix	JN0038	1min/kb	≤8kb	√	++++
2×Hot Start Taq Plus PCR MasterMix	JN0039	1min/kb	≤20kb	√	++++
2×Pfu PCR MasterMix	JN0031	1min/kb	≤6kb	×	+
2×Fast Pfu PCR MasterMix	JN0043	30min/kb	≤12kb	×	+
2×SYBR Green Realtime PCR MasterMix	JN0049	1min/kb	≤8kb	√	++
2×Genotyping PCR Kit（Normal）	JN0033	1min/kb	≤8kb	√	+++++
2×Genotyping PCR Kit（Fast）	JN0044	15s/kb	≤8kb	√	+++++
2×PCR MasterMix(防污染)	JN0047	1min/kb	≤8kb	√	+

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